壮族父系遗传历史研究（复旦大学 广西医科大学研究）（二）（请勿转载）

从广西省八个代表性壮族生活区收集了129份血样，分别代表8个壮族分支。使用传统的苯酚-氯仿方法从白细胞中提取DNA【8】。表1显示了不同分支和样本大小的详细信息。所有的个体均为壮族超过三代并且是不相关的健康男性，在招募时被要求签署知情同意书。

引入了两种Y-SNP分型策略。对于具有长度变异即缺失或插入的SNP，使用荧光PCR（引物信息显示于表2中），将获得的产物在3100遗传分析仪（ABI公司，美国）上电泳以确定个体的基因型。对于没有长度改变，即取代或颠换的SNP，使用PCR-RFLP（限制性片段长度多态性）[4,6,8-10]。 通过两种分型方法的Y-SNP分型结果的综合分析来确定每个受试者的Y单倍群。

为进行PCR使用了引物混合物，其含有M175，0.04μL；M121，0.03μL；M134，0.03μL； M117，0.06μL；M111，0.08μL；和M15，0.02μL。每个PCR反应（体积5μL）包括0.5U的KodDash聚合酶（TOYOBA），0.26μL引物混合物，10ng基因组DNA和缓冲液。PCR条件如下：98℃10s，55℃2s，74℃2s，30个循环，最后在4℃扩增。

为了测试不同分支之间的变异程度，使用与用于分型Y-SNP相同的方法分型Y-STR。关于Y-STR引物的信息也示于表2中。每个PCR系统的体积为5μL，含有KodDash聚合酶，0.05μL; 10×缓冲液，0.5μL; dNTP（各2.5mmol / L），0.4μL;基因组DNA，10ng;引物混合物，0.4μL。通常，在两个板中进行PCR反应。面板1包括引物对DYS389,0.05μL×2（正向和反向）; DYS390,0.07μL×2; DYS391,0.08μL×2;总体积为0.4μL。面板2包括DYS388，0.05μL×2; DYS392,0.07μL×2; DYS393,0.02μL×2;DYS19,0.06μL×2。